M31B01 - TP Bioréacteur pour production de beta galactosidase (E. Dugeny)
L'objectif du TP est de comprendre les mécanismes d'activation et d'action d'une enzyme telle que la β-galactosidase et les applications possible en industrie. Pour cela, les étudiants devront mettre en culture des cellules dans des bioréacteurs, qu'ils auront mis en place, et ils surveilleront la croissance de la souche. Arrivé à une certaine concentration de cellules (entre autre mesurée par l'absorbance au spectrophotomètre), ils induiront la synthèse de β-galactosidase en ajoutant un inducteur dans les bioréacteurs. Grace aux prélèvements effectués tout au long de la croissance (en séance
1), ils pourront par la suite doser l'activité de l'enzyme d'intérêt en fonction de l'inducteur utilisé, en mesurant l'absorbance du produit de la catalyse (en séance
2).Cette étude de la régulation du taux de synthèse de la β-galactosidase, chez Enterobacter sp. et Saccharomyces cerevisiae, est réalisée par une série de prélèvements et d'expériences menées sur 2 jours consécutifs : .
Au jour 1 : suivi de la croissance de la culture et induction de la synthèse de β-galactosidase .
Au jour 2 : dosage de l'activité β-galactosidase